RT-PCR a QPCR

Reverzní transkripční polymerázová řetězová reakce (RT-PCR)

RT-PCR vs. QPCR

Pokrok v oblasti biotechnologie vedl k objevení několika způsobů, jak se v průběhu let vyrovnat s požadavky na transplantaci orgánů. Předtím by mohl jedinec, který by dobrovolně daroval jakýkoli orgán bezprostředně po smrti pacientovi v nouzi, mohl jen zahájit operaci transplantací. Průběžné studie a výzkum biologů vedou k objevení kmenových buněk.

Kmenové buňky se týkají těch, které jsou odebírány z DNA embrya, které bude sloužit jako zdroj regenerace buněk, který by byl v zásadě klonem orgánu, kde byla DNA získána. Zatímco aktivisté zabývající se lidskými právy hovoří o zastavení takových postupů, úspěšné operace skutečně prokázaly účinnost vývoje kmenových buněk při transplantacích orgánů.

Předtím, než člověk dokáže ocenit a plně pochopit kmenové buňky, je však třeba se seznámit s různými terminologiemi spojenými s tímto vědeckým objevem. Pěstování kmenových buněk se zabývá DNA a jeho kódováním. Proto je pro studenty nebo pro všechny zájemce v oboru životně důležité rozlišovat mezi RT-PCR a qPCR.

Reverzní transkripční polymerázová řetězová reakce (RT-PCR) je jednou z mnoha variant polymerázové řetězové reakce nebo PCR. Tato laboratorní technika je široce používána v molekulární biologii, aby vědci mohli produkovat vícenásobné kopie určité sekvence DNA procesem, který byl vytvořen jako "amplifikace". Rozdíl mezi RT-PCR a tradiční PCR je, že RNA je poprvé transkribována zpětně jeho DNA komplement, který využívá reverzní transkriptázu. Nová komplementární DNA obsahující obrácenou transkripci pak bude amplifikována pomocí tradiční PCR nebo PCR v reálném čase.

Většina studentů, kteří studují tento proces, často dělá chybu při výměně reverzní transkripční PCR a PCR v reálném čase, jelikož dvě jsou zkráceny podobně. Aby se zabránilo zmatku, označují biologové PCR v reálném čase jako kvantitativní PCR v reálném čase nebo qPCR.

QPCR se značně liší od RT-PCR, protože qPCR je zodpovědný za měření zesílení, jak se vyskytuje. Lze říci, že RT-PCR zahajuje proces zesílení, zatímco qPCR ji měří, jak probíhá proces.

Kvantitativní PCR v reálném čase

QPCR skutečně revoluci metodu tradičního jednosměrného přístupu, pokud jde o kvantifikaci DNA a RNA, protože použití metody qPCR umožňuje biologům určit počáteční koncentraci jádrové kyseliny ještě předtím, než byly výsledky reakce pozorovány a poznačil.

Aplikace qPCR, která je nyní považována za nejsilnější a citlivější metodu analýzy genetických studií, se výrazně rozšířila. V současnosti se zabývá kvantitativní analýzou genové exprese, genotypizací, detekcí patogenů a analýzou SNP spolu s měřeními interferencí RNA.

QPCR se často kombinuje s procesem reverzní transkripce kvantifikovat posluchačskou RNA a mikroRNA přítomnou v buňkách tkání, které byly pozorovány a experimentovány. To pak dává další viditelný rozdíl mezi těmito dvěma: RT-PCR může být použit pro amplifikační proces, ale musí být spojen s qPCR pro účely kvantifikace.

Je také známo, že QPCR je mnohem kvantitativní, jelikož data mohou být shromažďována, jak postupuje exponenciální růstová (logická) fáze PCR. Biologové poznamenávají, že množství vedlejšího produktu PCR je přímo úměrné množství templátové nukleové kyseliny, která bude měřena pomocí qPCR.

Na druhou stranu, RT-PCR má zdaleka kvantitativní povahu, neboť dodržení intenzity amplifikovaného pásma na gelu podle stanoveného standardu koncentrace může vést k "semikvantitativnímu" závěru.

Souhrn:

1.QPCR a RT-PCR jsou oba termíny používané v biotechnologii a používají se pro produkci více kopií DNA. 2.RT-PCR se používá k amplifikaci obrácené transkripce kódu DNA; QPCR měří zesílení. 3.RT-PCR je pro amplifikaci, zatímco qPCR je pro kvantifikaci. 4.QPCR má kvantitativní povahu, zatímco RT-PCR není.